文章插图
3.发酵培养基
与种子培养及不同,发酵培养基不仅是提供给菌体生长繁殖所需要的营养和能源,而且是构成L-赖氨酸的碳架来源,要累积大量L-赖氨酸,就要有足够量的碳源和氮源,其量大大的高于种子培养基,对于菌体繁殖所必需的因子——生物素却要控制其用量 。
L-赖氨酸产生菌是异养微生物,只能从有机化合物中取得碳素的营养,并以分解氧化有机物产生的能量供给细胞中合成反应所需要的能量 。目前所发现的L-赖氨酸产生菌均不能利用淀粉,只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麦芽糖等 。
在L-赖氨酸发酵中氮源的用途:①组成菌体含氮物质;②组成L-赖氨酸的氨基;③调节pH值,形成L-赖氨酸铵;另外,一部分分解放出氨随排气溢出 。
无机盐是微生物生命活动所不可缺少的物质,其主要功能是构成菌体成分;作为酶的组成成分;酶的激活剂或抑制剂;调节培养基的渗透压;调节pH值和氧化还原点位等 。
在L-赖氨酸发酵中,由于通气和搅拌,产生少量泡沫是空气溶解于发酵液中和产生二氧化碳的结果 。因此,发酵的过程产生少量泡沫是正常的 。为了防止泡沫的过多生成和消除泡沫,一般要加少量的消泡剂 。
1.4.2 发酵培养基(g/L)[7]
水解糖150,甘蔗糖蜜6,尿素35,玉米浆5~10,硫酸镁0.7,氯化钾0.9,磷酸0.2,生物素2μɡ/L,泡敌1.0,接种量为7% 用NaOH(5%)溶液调pH 7.20
1.4.3 斜面培养基
保藏斜面培养基:牛肉膏l%,蛋白胨l%,氯化钠0.5%,琼脂2%,pH7.0 。
活化斜面培养基:葡萄糖0.1%,牛肉膏l%,蛋白胨l%,氯化钠0.5%,琼脂2%,pH7.0 。
1.4.4 一级种子培养基[3]
葡萄糖 2.5% 尿素0.5% 硫酸镁0.04%
磷酸氢二钾0.1% 玉米浆 2.5~3.5%
硫酸亚铁、硫酸锰各20ppm、pH7.0
1.4.5 二级种子培养基(g/L)[5]
水解糖40,糖蜜20,尿素5,磷酸氢二钾2,硫酸镁0.6,玉米浆5~10,泡敌0.6,生物素0.02mg/L,硫酸锰2mg/L,硫酸亚铁2mg/L,接种量为2% 。pH 6.8~7.0
1.5 淀粉的糖化
1.5.1 酸水解法[4]
酸水解法又称酸糖化法,是一种传统的水解方法 。以酸(无机酸或有机酸)为催化剂,在高温高压下将淀粉水解为葡萄糖的方法 。
该法具有生产工艺简单、设备简易、生产周期短、设备生产能力大等优点 。但是,由于水解反应是在高温、高压及较高酸浓度条件下进行的,因此,该法要求有耐腐蚀、耐高温、耐高压的设备 。此外,淀粉在酸水解过程中所发生的副反应较多,造成葡萄糖量减少以及不可发酵性糖类、色素等物质增多 。这不仅降低淀粉转化率,而且由于生产的糖液质量差,对而后的发酵、提取都带来不利影响 。并且酸水解法对淀粉原料要求严格,必须是精制淀粉,淀粉颗粒大小要均匀,不宜过大,否则易造成水解不透彻 。淀粉乳浓度也不宜过高,过高则淀粉转化率低 。因此目前酸解法已逐步被酶解法所取代 。
1.5.2 酶水解法
酶水解法制葡萄糖可分为两步:第一步是利用液化脚化淀粉水解成糊精和低聚糖等,使黏度大为降低,流动性增高,所以工业上称为液化 。第二步是利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水解为葡萄糖,在生产上称为糖化 。由于采用了酶液化和酶糖化工艺,故也称为双酶水解法 。
酶水解法(双酶水解法)的优点:
(1)淀粉水解是在酶的作用下进行的,酶解反应条件较温和,因此不需耐高温、耐高压、耐酸的设备 。同时,酶在反应过程中也不产生腐蚀性物质,对设备要求低,也改善了劳动卫生条件 。
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