血乳酸


血乳酸

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血乳酸【血乳酸】血乳酸,即Blood Lactic Acid,是体内糖代谢的中间产物,主要由红细胞、横纹肌和脑组织产生,血液中的乳酸浓度主要取决于肝脏及肾脏的合成速度和代谢率 。
在某些病理情况下(如呼吸衰竭或循环衰竭时),可引起组织缺氧,由于缺氧可引起体内乳酸升高 。另外,体内葡萄糖代谢过程中,如糖酵解速度增加,剧烈运动、脱水时,也可引起体内乳酸升高 。体内乳酸升高可引起乳酸中毒 。检查血乳酸水平,可提示潜在疾病的严重程度 。
基本介绍中文名:血乳酸
外文名:Blood Lactic Acid
分类:血液生化检查、胺基酸、氮化物
原理:全血乳酸测定,血浆乳酸测定
英文名Blood Lactic Acid医学检查分类血液生化检查、胺基酸、氮化物、有机酸测定原理(1)全血乳酸测定(分光光度法):在NAD存在下,LDH催化乳酸脱氢,氧化成丙酮酸 。加入硫酸肼使丙酮酸不断被转换消除,并促进反应完成 。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔,在340nm波长下测定NADH的量,计算乳酸的含量 。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):以氧化型辅酶Ⅰ(NAD)作氢受体,LDH催化L-乳酸脱氢,生成丙酮酸,NAD转变成还原型辅酶Ⅰ(NADH) 。酚嗪二甲酯硫酸盐(PMS)将NADH的氢传递给氯化硝基四氮唑蓝(NBT),使其还原 。在530nm波长的吸光度与乳酸含量呈线性关係 。试剂(1)全血乳酸测定(分光光度法):①50g/L偏磷酸(MPA):称取5.0g MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配製 。②30g/L偏磷酸:称取3.0g MPA,溶于蒸馏水中,并稀释到100ml,新鲜配製 。③Tris-硫酸肼缓冲液,pH9.6(Tris 79mmol/L;硫酸肼400mmol/L);取1mol/L氢氧化钠350ml,加入Tris 4.79g,硫酸肼26g,EDTA-Na2 0.93g,以1mol/L氢氧化钠调至pH 9.6,用蒸馏水稀释到500ml,4℃保存可稳定8天 。④27mmol/L NAD溶液:根据需要量称取NAD溶于蒸馏水中,4℃可稳定48h 。⑤LDH溶液:取LDH原液,用生理盐水稀释成1500U/ml(如用SigmaⅢ型LDH,该製品从牛心提制,每毫升含10mg蛋白,每毫克蛋白具有LDH活性400~600U,用盐水稀释成3mg/ml蛋白即可) 。⑥1mmol/L(9.08mg/dl)乳酸标準液:精确称取L-乳酸锂9.6mg(或DL-乳酸锂19.2mg),以少量蒸馏水溶解,加入25μl浓硫酸,用蒸馏水稀释到100ml,4℃保存可长期稳定 。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):①0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 9.0):取Tris 12.12g,溶于约800ml蒸馏水中,加入TritonX-100 40ml,混匀,以1mol/L盐酸调节至pH9.0,蒸馏水稀释至1L 。②无乳酸蛋白液:取Sephadex G25,用蒸馏水充分溶胀后装柱 。层析柱内径16mm,装柱高360mm 。有蒸馏水反覆流洗后,取20ml肝功能试验正常的混合血清上柱,用蒸馏水洗脱 。待洗脱物开始出现混浊时收集,共收集20ml,加入少许氯化钠(约0.1g)及叠氮钠20mg,置冰柜保存 。按本法测定乳酸(即无乳酸蛋白液代替标本进行测定),测定管与对照管吸光度之差应小于0.015 。可按100ml上述缓冲液加无乳酸蛋白液5ml,混合后置冰柜保存 。③乳酸脱氢酶溶液:用全血法 。④5mmol/L乳酸标準液:溶解DL-乳酸锂96mg或L-乳酸锂48mg于蒸馏水中并稀释至100ml,4℃保存 。LDH只催化L(+)-乳酸 。⑤呈色剂:溶解NBT82mg于20ml蒸馏水中,可稍加热助溶,不溶物需离心去除 。再加入NAD200mg,最后中入PMS 5mg,混合后置棕色瓶中,4℃保存,至少可用6个月 。操作方法(1)全血乳酸测定(分光光度法)①应在空腹及休息状态下抽血 。不用止血带,不可用力握拳 。如用止血带,应在穿刺后除去止血带2min后再抽血 。最好用肝素化的注射器抽血,抽取后立即注入预先称量的含冰冷蛋白沉澱剂的试管中 。如用血浆测定,每毫升血用10mg氟化钠及2mg草酸钾抗凝,立即冷却标本,并在15min内离心 。抽血前试管编号,称重(Wt)并记录 。加入6ml MPA(50g/L),再称重(Wm)后放入冰浴中,每份标本最好作双管分析 。抽血后,立即注入上述试管中,每管2ml 。颠倒混合3次,不可产生气泡 。待试管温度与室温平衡后,再称重(Wb) 。静置至少15min后,离心沉澱(400r/min,15min) 。上清液必须澄清 。计算稀释因数D:D=Wb-Wt/Wb-Wm②偏磷酸在水溶液易中形成多聚体(HPO3),水化成正磷酸(HPO3+H2O→H3PO4) 。正磷酸不沉澱蛋白质,偏磷酸溶液沉澱蛋白的能力在4℃时仅能维持大约1周 。③本法线性範围达5.6mmol/L(50mg/dl) 。④本法不用过氯酸作蛋白沉澱剂 。⑤一般乳酸锂未标明L-或DL-者,均为DL-型,L-型乳酸锂价格昂贵 。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法)混匀后,用分光光度计在530nm波长,10mm光径比色杯,以蒸馏水调零读取各管吸光度 。①本法条件下,NBT还原生成物在反应液中十分稳定,无混浊和沉澱,吸光度久置不变 。②肝素抗凝血浆、血库ACD保养液抗凝血浆、脑脊液、尿液、胃液等均可用本法测定 。③加入蛋白质对反应及生成物溶液的稳定是必要的 。同时加入蛋白质及表面活性剂,可提高灵敏度及稳定性 。Brij-35和TritonX-100有同样效果 。人血清白蛋白中含乳酸浓度较高,不适用 。因人血清白蛋白的显色强度平均较牛血清白蛋白高1.06倍,如用牛血清白蛋白,且仅加于标準管中时,标準管吸光度须乘此数 。④无乳酸蛋白液可与缓冲液预先混合后再加入1ml,代替表2中分别加入 。⑤本法线性範围达8.0mmol/L(73mg/dl) 。⑥吸光度随孵育时间延长而增加,必须準确10min 。加入0.1mol/L盐酸后吸光度不变 。⑦抗凝剂用肝素-氟化钠较好(1mg肝素,6mg氟化钠可抗凝5ml血) 。血液抽出后,血标本管置冰浴中送检,儘快分离血浆,放冰室保存待测 。草酸钾对LDH有一定抑制作用,抽血较少而草酸钾相对多时尤为明显 。正常值(1)全血乳酸测定(分光光度法):全血乳酸0.5~1.7mmol/L(5~15mg/dl) 。尿液乳酸为5.5~22mmol/24h 。(2)血浆及血清乳酸测定(比色法):小于2.4mmol/L(22.0mg/dl,呈正偏态分布,95%百分位数上限) 。临床意义组织严重缺氧可导致三羧酸循环中丙酮酸需氧氧化的障碍,丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增强,血中乳酸与丙酮酸比值增高及乳酸增加,甚至高达25mmol/L 。这种极值的出现标誌着细胞氧化过程的恶化,并与显着的呼吸增强、虚弱、疲劳、恍惚及最后昏迷相联繫 。即使酸中毒及低氧血症已得到处理,此种高乳酸血症常为不可逆的 。见于休克的不可逆期、无酮中毒的糖尿病昏迷和各种疾病的终末期 。在休克、心失代偿、血液病和肺功能不全时,常见的低氧血症同时有高乳酸血症,在低氧血症及原发条件处理后常是可逆的 。在肝脏灌流量降低的病例,乳酸由肝的移除显着降低,会出现乳酸酸中毒 。安全1.不慎与眼睛接触后,请立即用大量清水沖洗并徵求医生意见 。2.穿戴适当的防护服、手套和护目镜或面具 。3.若发生事故或感不适,立即就医(可能的话,出示其标籤) 。